納米抗體技術(shù)
Nanoantibody Discovery
羊駝駱駝免疫
羊駝基地
免疫服務(wù)流程
抗原乳化
01
根據(jù)抗原體積加入等體積的弗氏佐劑充分混勻進(jìn)行乳化。性狀:乳白色乳劑,滴水不擴(kuò)散
免疫
02
采血部位:頸部淋巴結(jié)附近左右兩側(cè)
免疫前乳劑要恢復(fù)至室溫免疫后觀察羊駝狀態(tài)良好無(wú)不適癥狀。
免疫部位:頸部淋巴結(jié)附近左右兩側(cè)
PBMC分離
03
采集50 mL血液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,并保存于RNAiso Plus中
免疫周期表
免疫操作 | 時(shí)間節(jié)點(diǎn) | 常規(guī)采血/免疫劑量 | 免疫方式 | 佐劑 |
---|---|---|---|---|
免疫前采血 | 第0-2天 | 采血(5 mL) | / | / |
初次免疫 | 第0-2天 | 500 μg | 頸部淋巴結(jié)附近左右兩側(cè)注射 | Sigma Adjuvant |
二次免疫 | 第17天 | 500 μg | 頸部淋巴結(jié)附近左右兩側(cè)注射 | Sigma Adjuvant |
三次免疫 | 第31天 | 500 μg | 頸部淋巴結(jié)附近左右兩側(cè)注射 | Sigma Adjuvant |
四次免疫 | 第45天 | 500 μg | 頸部淋巴結(jié)附近左右兩側(cè)注射 | Sigma Adjuvant |
血清滴度測(cè)定PBMC分離 | 第52天 | 采血(50 mL) | / | / |
四次免疫后抗體效價(jià)檢測(cè)
稀釋倍速 | 未免 | 一免 | 二免 | 三免 | 四免 |
---|---|---|---|---|---|
2000 |
0.066 |
0.551 |
1.251 |
2.338 |
3.968 |
4000 |
0.065 |
0.377 |
0.771 |
1.422 |
3.096 |
8000 |
0.059 |
0.293 |
0.469 |
0.99 |
2.301 |
16000 |
0.061 |
0.219 |
0.354 |
0.673 |
1.724 |
32000 |
0.059 |
0.129 |
0.245 |
0.461 |
1.157 |
64000 |
0.067 |
0.093 |
0.103 |
0.321 |
0.741 |
128000 |
0.061 |
0.068 |
0.072 |
0.189 |
0.445 |
blank |
0.054 |
0.064 |
0.04 |
0.1 |
0.189 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和討論
① 羊駝在一至四次免疫后抗體效價(jià)依次增高,表明其針對(duì)抗原產(chǎn)生的免疫應(yīng)答隨免疫次數(shù)逐漸增強(qiáng)
② 第四次免疫后免疫效價(jià)達(dá)到105,符合建庫(kù)標(biāo)準(zhǔn),可以對(duì)羊駝進(jìn)行采血分離PBMC并進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)
交付內(nèi)容:
① 抗體效價(jià)檢測(cè)報(bào)告
② 每次免疫后的血漿
③ 保存在Trizol中的PBMC(外周血單個(gè)核細(xì)胞)
合作單位
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